|
|
|||||||||
| |||||||||
|
ВЛИЯНИЕ ВОДНОЙ НАГРУЗКИ НА МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ И ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
На правах рукописи ПАВЛОВА ИЛОНА ОЛЕГОВНА 03.03.01 -физиология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Г.М.Баишева
Самара 2010
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Баишева Гульнара Максимовна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Якунин Валерий Ефимович
доктор биологических наук Ведясова Ольга Александровна Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Вода является не только основой жизни на Земле, но и существенным фактором формирования здоровья населения и качества жизни. Период 2005-2015гг. провозглашён ООН декадой «Вода для жизни», поскольку, несмотря на колоссальные водные ресурсы на нашей планете, доля воды, пригодной для питья, ничтожна. Одно из перспективных направлений улучшения качества питьевой воды - метод её структурирования (Зенин С.В.,1999; Слесарев В.И., 2000; Chaplin, 2000). Известно, что вода, имеющая кластерную структуру, отличается улучшенным качеством с точки зрения как органолептических свойств, так и соотношения минеральных компонентов, бактериологических показателей (Зенин С.В.,1999; Chaplin M.F., Bucke J., 2000; Mashimo S., 1999; Eisenberg D., Kauzmann W., 2005), что, несомненно, будет способствовать решению валеологических задач (Бадьин П.П., 2005; Рахманин Ю.А. с соавт.,2006; Cho C.H. et al., 1996). Несмотря на большое количество данных, полученных о влиянии структурированной воды на различные биологические объекты и культуры тканей (Davenas E. et al.,1988; Endler P.C. et al., 1994; Rein G., 1995, 1996; Berenyi E. et al., 1996; Racz A., Cipriŝ J.J, 2010), воздействие её на организм человека в целом остаётся не изученным. Вода заполняет всё пространство внутри клеток и между клетками. Будучи главной жидкостью в организме, она служит растворителем для питательных веществ, является средой для безопасного выведения токсинов и продуктов жизнедеятельности, определяет качество крови, влияет на окислительно-восстановительные процессы, на гомеостаз в целом (Бриль Г.Е., Петросян В.И.,2000; Davenas E. et al., 1988; Franks A., 2000). Наличие большого разнообразия специфических водных каналов - аквапоринов - указывает на «разборчивость» организма в вопросах перемещения воды из одной среды в другую (Krane C.M. et al., 2001;Verkman A.S., 2009; Gomes D. et al., 2009). В организме мужчины и женщины норма содержания количества воды должна составлять 60-65% и 50-55% соответственно. Однако, исследования показывают, что в подавляющем большинстве случаев водный компонент внутренней среды организма современного человека снижен на 10-15%, что может быть причиной самых различных заболеваний. Структурные изменения клеток, сопровождающие все физиологические процессы, предопределены, главным образом, изменениями внутриклеточной воды (Тринчер К.С., 1967, Бецкий О.В., 1998, Улащик В.С.,2002, Cameron I.L.et al., 1997; Linder M. et al., 1999, 2001; Castro M., 1999; Robinson G.W.,Cho C.H., 1999; Bellisent-Funel M.C., 2000). Изучение физико-химических и метаболических показателей биологических сред организма, доступных для неинвазивных методов исследования, становятся все более актуальными. Описаны маркеры многих патологических состояний (воспаление, застойные явления, интоксикации, камнеобразование и др.), которые в различных биологических жидкостях имеют идентичные характеристики (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н., 2001; Greabu M. et al., 2009; Miller et al, 2010). Значительный интерес представляет изучение параметров гомеостаза ротовой жидкости, так как имеется корреляция между величинами и динамикой физико-химических показателей в ротовой жидкости и в плазме крови (Денисов И.М.,2004, Гергель Н.И.,2005; Bullon P. et al., 2005, 2007; Nandan R.K. et al., 2005; Fu et al., 2007). Ротовая жидкость является доступной биологической средой, практически неограниченной по возможности забора материала. Имеются данные, что соматические и стоматологические заболевания отражаются на её биохимических, биофизических, морфологических свойствах (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н., 2001; Гильмияров Э.М., 2000,2004,2006, Карслян Л.С.,2006; Mendel, 1987; Edgar W.M., 1992; Astakhova N.V., et al., 2009; Luca E. et al., 2009; Karlinsey R.L. et al., 2009; Greabu et al., 2009). В связи с этим интересным представляется изучение влияния употребления структурированной воды на регуляцию процесса саливации и показатели гомеостаза ротовой жидкости. Физико-химические константы внутренней среды мозга напрямую влияют на функцию нейронов, клеток глии, на качество и скорость передачи нервных импульсов, мозговой деятельности в целом (Voss H.U., Schiff N.D., 2009; Zelenina M., 2010; Kempton M.J. et al., 2010). Выяснение влияния употребления структурированной воды на психофизиологические и регуляторные процессы, метаболические показатели, ионный баланс организма раскроет новые возможности для увеличения жизнеспособности и оздоровления населения, повышения качества жизни. Цель настоящего исследования заключается в выяснении механизма действия водной нагрузки на показатели гомеостаза организма. Задачи: 1. Провести психофизиологическое тестирование, определить уровень тревожности, активности, самочувствия, настроения в процессе употребления дополнительных объемов воды у студентов-добровольцев. Оценить объем внимания и коэффициент работоспособности испытуемых. 2. Проанализировать динамику показателей оптических сред глаза в процессе эксперимента. 3. Исследовать физико-химические показатели ротовой жидкости (рН, оптическую плотность, удельную электропроводность), а также содержание калия, кальция, натрия, хлора, фосфора, магния в ротовой жидкости. 4. Изучить содержание общего белка и альбумина в ротовой жидкости в динамике исследования. 5. Оценить влияние употребления дополнительных объемов структурированной и неструктурированной воды на кристаллоскопическую картину ротовой жидкости. 6. Проанализировать результаты исследований и разработать практические рекомендации. Научная новизна. Впервые представлен блок данных, подтверждающих, что прием структурированной воды статистически достоверно изменяет физико-химические, физиологические и биохимические показатели ротовой жидкости у испытуемых. Увеличилась скорость саливации, процессов секреции и рекретирования компонентов ротовой жидкости, соответственно повысилось поступление в ротовую жидкость низкомолекулярных соединений (ионов калия, кальция, магния и фосфора). Учитывая особенность ротовой жидкости, а именно рециркуляцию минеральных веществ и повторное использование их в обмене, можно предположить увеличение интенсивности обменных процессов. Получены новые данные, свидетельствующие об оптимизации состава ротовой жидкости и усилении самоочищающей функции ротовой жидкости. Выявлено улучшение условий минерализации эмали, о котором свидетельствует увеличение содержания кальция в ротовой жидкости на фоне оптимальной рН. Уменьшилось содержание ионов хлора, содержание общего белка и альбумина в ней. Продемонстрирована кристаллоскопическая картина: соотношение солевой и белковой зон и характерный рисунок морфограмм свидетельствуют об улучшении состава ротовой жидкости. Установлено увеличение скорости саливации при одновременном повышении минерализации и снижении белкового компонента ротовой жидкости, что свидетельствует об активизации парасимпатических влияний на процесс секреции слюны в условиях употребления структурированной воды. Впервые показано,что употребление структурированной воды способствует увеличению степени прозрачности внутренних сред организма на примере слюны и жидких сред глаза, на что указывают показатели оптической плотности ротовой жидкости и прозрачности оптических сред глаза. Установлено замедление процесса снижения зрения у испытуемых с миопией по сравнению со среднестатистическими значениями. Показан эффект от применения структурированной воды на уровне целостного организма. У ряда добровольцев было отмечено снижение избыточного веса, что свидетельствует об активации процессов метаболизма; по данным анкетирования улучшилось качество сна, легче стал процесс пробуждения; повысилась устойчивость психофизиологических процессов; отмечены уменьшение личностной и ситуационной тревожности, стабильность самочувствия, повышение настроения и активности. Научно-практическая значимость. Результаты, полученные при проведении исследований, имеют теоретическое и практическое значение. Впервые научно обоснована целесообразность употребления структурированной воды в определенном режиме. Это открывает возможность рекомендовать структурированную воду как простой и доступный способ укрепления психофизического и физического здоровья, как один из способов поддержания зрения, профилактики заболеваний полости рта (камнеобразования, кариеса, заболеваний пародонта). Выяснены регуляторные свойства и механизмы воздействия употребления структурированной воды. Результаты исследований обеспечат объективные критерии выбора средств мягкой коррекции вегетативных и метаболических нарушений. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Ежедневный прием структурированной воды способствует уменьшению личностной и ситуационной тревожности, улучшению самочувствия, настроения, повышению активности. 2. Употребление структурированной воды приводит к изменениям физико-химических параметров биологических сред организма, в частности, ротовой жидкости и оптических сред глаза. 3. Употребление структурированной воды ведет к снижению концентрации альбумина и общего белка при одновременном увеличении резерва кальция, фосфора и магния в ротовой жидкости. Апробация работы. Результаты исследований были представлены на IX Международной научной конференции «Здоровье семьи в XXI веке» (Далянь, Китай, 2005),VI Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» (Москва, 2005), Х Международной научной конференции «Здоровье семьи в XXI веке» (Бангкок - Патайя, Тайланд, 2006), на VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006), на совместном заседании кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой и нормальной физиологии Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2009). Внедрение результатов исследования в практику. Материалы исследования используются в научных разработках и педагогическом процессе на всех факультетах на кафедрах нормальной физиологии и фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», на кафедре биохимии с курсами физколлоидной и токсикологической химии ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию». Публикации. Опубликовано 12 работ, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в том числе имеется 1 патент. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материала и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация изложена на 152 страницах, иллюстрирована 20 рисунками, содержит 18 таблиц. В работе использовано 275 источников, из них 139 отечественных и 136 зарубежных авторов.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объект и методы исследования Исследования проводились на кафедре нормальная физиология Самарского государственного медицинского университета. В исследовании приняло участие 207 человек, из них: - экспериментальная группа - 31 клинически здоровый, с санированной ротовой полостью, студент Самарского государственного медицинского университета, средний возраст - 19,7 ± 1,5 лет, в том числе 73,3% девушки и 26,7% юноши. В течение 6 месяцев испытуемые ежедневно употребляли не менее 2 литров структурированной воды; - группа сравнения - 69 практически здоровых добровольцев в возрасте 17 - 19 лет. Девушки составили 77,4%, юноши - 22,6%. В течение 6 месяцев участники данной группы употребляли не менее 2л воды в сутки различного качества (водопроводная очищенная, фильтрованная, бутилированная и т.п.); - контрольная группа - 107 клинически здоровых человек. Лица в возрасте от 20 до 29 лет, из них мужчины составили 58,4%, женщины - 41,6%. Участники контрольной группы не придерживались какого-либо специального питьевого режима ни по количеству, ни по качеству употребляемой жидкости. В работе использовался прибор для доочищения, активации и восстановления природной структуры питьевой воды «Аквадиск» (ОАО «Аква-Система», г. Москва, Сертификат ГОССТАНДАРТА России № 5652703 от 24.09.2004, Санитарно-эпидемиологическое Заключение Федерального Центра Госсанэпиднадзора Минздрава России №77.ФЦ.19.361.П.000294.12.03 от 19.12.2003г.). Материалом для исследования служила ротовая жидкость. Биохимические методы. Исследования показателей обмена ротовой жидкости проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «Synchron CX4» фирмы «Beckman» (США) с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Beckman» (США). Оценку минерального состава (магний, кальций, фосфор) проводили на автоматическом биохимическом анализаторе «Hitachi - 902» фирмы «Roch-Diagnostics», производства Японии с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Roch-Diagnostics» (Швейцария). Определяли концентрацию общего белка, альбумина, магния, фосфора, кальция. Концентрацию ионов натрия, калия, хлоридов определяли ионоселективным методом. Величину рН и окислительно-восстановительного потенциала ротовой жидкости определяли на приборе рН Meter MP 220 "Mettler Toledo" (Швейцария). Удельную электропроводимость ротовой жидкости измеряли на кондуктометре Conductivity Meter OK 102/1. Для исключения инфицированности испытуемых вирусами гепатита В и С проводилось определение HBsAg и HBcorAg, anti-HCV (Ig M, Ig G) методами иммуноферментного анализа с применением иммуноферментного анализатора «Униплан» и полимеразной цепной реакцией на амплификаторе Био-Рад «My-Cycler» (США). Кристаллография. Исследование характера самоорганизации ротовой жидкости проводили методом клиновидной дегидратации (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н.,2001) с использованием компьютерной программы для анализа кристаллоскопической картины ротовой жидкости пациента (Е.В. Дукович, и др., 2007). Офтальмологические исследования. Проводился анализ рефрактограмм оптических сред правого и левого глаза: рефракция (Sph); астигматизм (Cil); Axis; VA; Reflex; прозрачность оптических сред и PD на аппарате кераторефрактометр GR-3100K «Grand Seiko» (Япония). Психофизиологические методы. Интегральная оценка психофизиологического состояния проводилась путем изучения объема внимания и коэффициента работоспособности с помощью корректурных таблиц Анфимова, теста Ханина-Спилберга, теста САН (самочувствие, активность, настроение).
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью стати стического пакета SPSS 12.0 (statistical package for social sciences), Microsoft Excel 2000, MS Office 2000, S-plus 2000 и Statistica 5.5. Определялись следующиестатистические характеристики: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка от средней арифметической (m), медиана (Ме), квартили (Q1-Q3), min, max, стандартное отклонение (stand. deviat), 95% интервал. Помимо статистической характеристики вариационных рядов проводилась сравнительная оценка генеральных параметров по разности, наблюдаемой между сравниваемыми выборками. В зависимости от статистических критериев: параметрические (t - критерий Стьюдента) и непараметрические (U-критерий Уилкоксона). Для выявления сопряженности между различными показателями, был проведен корреляционный анализ. Для выборок с нормальным распределением использовался параметрический метод - коэффициент корреляции Пирсона. Для остальных переменных был использован метод - коэффициент корреляции Кендалла (Лакин Г.Ф.,1990; Платонов А.Е., 2000).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Проведенные исследования позволили получить блок новых данных о влиянии качества употребляемой воды на метаболические, психофизиологические данные, на показатели состояния оптических сред глаза и их регуляцию. 1.Влияние употребления структурированной воды на физико-химические параметры биологических сред организма Сравнение исходных физико-химических показателей ротовой жидкости у испытуемых до начала исследования и у практически здоровых людей свидетельствует, что таковые у испытуемых находятся, как правило, в пределах среднестатистической нормы. В результате эксперимента отмечалось динамическое изменение физико-химических параметров ротовой жидкости. Таблица 1. Исходные показатели ротовой жидкости испытуемых (до начала исследования)
Таблица 2. Физико-химические показатели ротовой жидкости в процессе эксперимента (M±m)
Примечание: *** р1-2,р1-3 ,р<0,0001, достоверность различий между группами УСВ и УНВ, **р<0,0001, *р<0,05
Изменение питьевого режима (употребление не менее 2л воды в сутки) вне зависимости от качества употребляемой воды, ведет к увеличению скорости выработки ротовой жидкости и к увеличению скорости саливации. Исследование ротовой жидкости испытуемых объективно выявило повышение прозрачности и уменьшение показателя оптической плотности на 63,2%, а именно с 0,087±0,004 единиц до начала эксперимента до 0,032±0,002*** единиц (р<0,0001) по окончании 3-го месяца исследования и до 0,025±0,002*** единиц (р<0,0001) - по окончании 6-го месяца. На фоне увеличения количества употребляемой воды эти показатели сходную тенденцию имеют и в группе сравнения. Это может быть связано с изменением концентрации общего белка с 2,29±0,34 г/л до 1,60±0,06 г/л и 1,28±0,24 г/л, с альбуминов с 0,283±0,7 г/л до 0,056±0,01 г/л и 0,273±0,02 г/л через 6 месяцев, в I и II группах соответственно. Значительное уменьшение оптической плотности ротовой жидкости (с высокой степенью достоверности различий р<0,0001) при ежедневном приеме 2 л воды указывает, по всей видимости, на общее изменение многих физико-химических, биохимических показателей ротовой жидкости, процессов их регуляции и состояния внутренних сред организма в целом. На показатели оптической плотности ротовой жидкости влияет в большей степени питьевой режим - употребление не менее двух литров в сутки, чем качественные показатели употребляемой воды. Комплекс указанных изменений в группе УСВ с учетом увеличения ряда минеральных компонентов характерен для парасимпатических влияний на процесс слюноотделения (Camargo L. et al., 2007). У исследуемых нами практически здоровых лиц, значения рН ротовой жидкости колебались в пределах от 5,59 до 7,95 ,однако, средние значения рН все шесть месяцев исследования находились в пределах нормы 7,08 (до употребления структурированной воды), 7,03 (через 3 месяца) и 7,13 (через 6 месяцев). Оптимальная величина рН на всех этапах исследования (около 7,1) указывает на стабильность работы буферных систем полости рта (бикарбонатной, фосфатной, белковой). Такое постоянство чрезвычайно важно для правильного протекания обменных процессов в клетках, стабильности эмали. (Шмидт Р., Тевс Г.,1996; Denny P.C., 2009; Li L.et al, 2009; Ribelles Llop M et al., 2010). В группе сравнения употребление аналогичного количества неструктурированной воды приводит к незначительному сдвигу значения рН в кислую сторону с 7,13 до 6,8 (р<0,03). Вероятно, изменение рН в кислую сторону может быть связано со снижением всех исследуемых нами компонентов буферных систем полости рта (общий белок, фосфаты и т.д.) Можно предположить, что рН ротовой жидкости может быть связан с рН употребляемой воды (Horswill C.A. et al.,2006). Так, проводились эксперименты по наблюдению динамики рН воды при механических ее движениях. Показано, что колебания воды с частотами, близкими к 1Гц, сопровождаются изменениями рН, приводящие к росту концентрации протонов (Никишина Н.Г., Рудько Б.Ф., Стыркас А.Д., 2005; Horswill С.А. et al.,2006). Из приведенных данных видно, что значительную роль в стабильности рН ротовой жидкости оказывает качество питьевой воды. Биологические жидкости организма, являясь сложными электролитами, содержат кроме различных анионов и катионов, разнообразные белковые молекулы и другие соединения, затрудняющие движение заряженных частиц. Удельная электропроводность - интегральная величина, отражающая общее содержание в данной среде анионов и катионов органического и минерального происхождения. В результате употребления структурированной воды в ротовой жидкости у исследуемых отмечается постепенное снижение электропроводности с 3,55 до начала эксперимента до 3,5 (через 3 месяца) и 2,4 (через 6 месяцев) - на 32,3%. Это может быть связано с понижением уровня общего белка, альбуминов и изменением уровня электролитов, в частности натрия и хлора, в ротовой жидкости. Как известно, основными процессами, обеспечивающими жизнедеятельность любого организма, являются окислительно-восстановительные реакции. рН и редокс-потенциал тесно взаимосвязаны: окислительные процессы понижают показатель рН (чем выше редокс-потенциал, тем ниже рН), восстановительные - способствуют повышению рН. В свою очередь, показатель рН влияет на величину редокс-потенциала. В организме человека энергия, выделяемая в ходе окислительно-восстановительных реакций, расходуется на поддержание гомеостаза и регенерацию клеток организма, т.е. на обеспечение процессов жизнедеятельности организма. Окислительно-восстановительный потенциал (ОВП) внутренней среды организма в норме всегда имеет отрицательное значение, в пределах -100 - -200 mV. ОВП питьевой воды обычно находиться в пределах от +100 до +400 mV. Указанные различия ОВП внутренней среды организма человека и питьевой воды означает, что активность электронов во внутренней среде организма человека намного выше, чем активность электронов в питьевой воде. Количество энергии, затрачиваемой организмом на достижение биосовместимости воды, пропорционально ее количеству и разности ОВП воды и внутренней среды организма. Согласно синергетике (теории, рассматривающей процессы самоорганизации, устойчивости, распада и возрождения структур живой и неживой материи), информация, содержащаяся в жидкой фазе на молекулярном уровне, при дегидратации переводится на макроуровень в виде различных структур, которые становятся доступными для наблюдения (Шатохина С.Н.,Разумова С.Н., 2006).Одна и та же биологическая среда может характеризоваться набором кристаллов различной морфологии и дефектности (Verdier J.M. et al., 1993). Причины полиморфизма кроются в полидисперсности материала по молекулярной массе и конфигурации молекул, а также наличии в субстрате упорядоченныхмакромолекулярных комплексов - мицеллярных липопротеидов. Кристаллограммы можно описать как квазипериодическую структуру, определяемую наличием многоконтурной упорядоченной текстуры с выраженной ориентацией. В литературе имеются сведения об использовании кристаллогенных свойств слюны для ранней диагностики ряда заболеваний, таких как рак предстательной железы (Денисов А.Б., Пушкарь Д.Ю., 2006), определение степени тяжести черепно-мозговой травмы (Гайворонская В.И., 1999), в диагностике инфекцированности Helicobacter Pylori (Алексеева О.П., Воробьева А.В.,2003) и др. Фация ротовой жидкости здорового человека имеет 2 отчетливые зоны - центральную (как правило, большую) и краевую (меньшую). Центральная зона - солевая, состоит из дендритных структур четких геометрических очертаний, иногда с вкраплениями отдельных розеткообразных кристаллов. В периферической зоне (белковой, аморфной) могут быть немногочисленные кристаллы пластинчатого характера. Установлено, что капля биологической жидкости в процессе дегидратации выступает как единая система, в которой все процессы самоорганизации проходят в согласованном порядке (Мартушевич А.К., Камакин Н.Ф., 2007).
Рис.1а. До начала эксперимента Рис.1б. Через 3 месяца. Рис.1в. Через 6 месяцев. Рис.1. Кристаллографическая картина ротовой жидкости одного из испытуемых в динамике Визуальный анализ кристаллограмм до начала эксперимента показал, что центральная или солевая зоны слабо выражены, представлены беспорядочным построением кристаллов и белковыми конгломератами. Белковая или краевая зона имела слабо прозрачное состояние. Через 3 месяца употребления структурированной воды в 39,3% образцов солевая зона приобрела упорядоченное построение, увеличилась длина кристаллов. В белковой зоне выявлено увеличение прозрачности. В конце 6-го месяца эксперимента в кристаллограммах у 75% испытуемых солевые кристаллы приобрели наиболее удлиненную и более правильную геометрическую форму. При этом белковая зона в пробах приобрела наибольшую прозрачность относительно такого показателя до начала эксперимента и на 3-м месяце испытания. Визуально выявленное на кристаллограммах увеличение прозрачности белковой зоны подтверждается объективными результатами биохимического анализа: уменьшился показатель оптической плотности почти в 3,5 раза; уменьшилось количество общего белка на 43% по окончании 6-го месяца. На двух этапах эксперимента (до начала и на 6-м месяце) проводился анализ рефрактограмм оптических сред правого и левого глаза: рефракция (Sph); астигматизм (Cil); Axis; VA; Reflex; прозрачность оптических сред и PD (таблицы 3,4). Анализ данных всех испытуемых показал, что только рефракция правого глаза уменьшилась на -0,13D и этот показатель не изменялся у левого глаза. Обращает на себя внимание увеличение показателя прозрачности оптических сред правого глаза испытуемых (с 204 до 228 ед.) За этот же период не выявлено статистически достоверных изменений показателей оптических сред левого глаза испытуемых. Таблица 3. Показатели оптических сред левого глаза испытуемых в начале исследования и через 6 месяцев приема структурированной воды
Таблица 4. Показатели оптических сред правого глаза испытуемых в начале исследования и через 6 месяцев приема структурированной воды
По данным литературы, существует общая тенденция снижения показателей рефракции у жителей России за один год в среднем на -1,4D (Нефедовская Л. Ф., 2008; Тарутта Е. П., 2008). У испытуемых, участвовавших в эксперименте за 6 месяцев рефракция практически не изменилась, показатель уменьшился только на - 0,13 D, что на 85% меньше полугодового среднестатистического снижения зрения у россиян. 2. Влияние структурированной воды на показатели минерального и белкового обмена ротовой жидкости в динамике Общая концентрация белка в слюне и спектр белков играют важную роль в обеспечении гомеостаза полости рта, включая минерализующую, восстановительную, репаративную, пищеварительную, регенераторно-трофическую функции, а также защиту от повреждающего действия химических, физических и механических факторов. Они стабилизируют мицеллярную структуру слюны, обеспечивая ее перенасыщенность гидроксиапатитом, что необходимо для минерализации и реминерализации твердых тканей зуба. По данным разных авторов в смешанной слюне человека содержится 0,5 - 4 г/л белков (Rantonen P.J., Meurman J.H., 2000), 1,74-2,0 г/л (Денисов А.Б., 2003). Низкий уровень белков в слюне по сравнению с кровью объясняется тем, что белки крови слабо экскретируются через слюнные железы, в слюне находятся преимущественно белки, синтезируемые в ацинусах желез (Елизарова В.М., Петрович Ю.А., 1997, 2002). У исследуемых добровольцев, употреблявших структурированную воду (УСВ), среднее значение общего белка до начала эксперимента составляло 2,29±0,34 г/л, с большим разбросом значений внутри группы (от 0,1г/л до 7,2 г/л). Через 3 месяца в группе УСВ разброс значений внутри группы составил 0,2г/л-2,2г/л, среднее значение -1,34±0,09 г/л. Снижение в образцах ротовой жидкости испытуемых общего белка, скорее всего, отражает эти изменения в плазме крови и свидетельствует о значительной функциональной перестройке физиологических систем организма в условиях водной нагрузки в первые 3 месяца. Через 6 месяцев среднее значение общего белка внутри опытной группы в ротовой жидкости выросло до 1,60±0,06 г/л по сравнению со вторым периодом опыта. Высокая достоверность различий между показателями третьего и шестого месяцев (р<0,03) дает возможность предположить, что дальнейшее употребление структурированной воды приводит к стабилизации уровня белка у всех участников эксперимента. В группе добровольцев употреблявших неструктурированную воду (УНВ) отмечается аналогичная тенденция. Перед переходом на новый питьевой режим среднее значение белка было 2,29±0,34 г/л, к концу наблюдения оно составило 1,28±0,24 г/л, с достоверностью различий р<0,05. При изменении объема употребляемой жидкости изменились объем и скорость саливации, уменьшилась доля сухого остатка. Альбумин - основной компонент плазмы, обеспечивающий онкотическое давление. В смешанной слюне человека содержится 0,05-0,3 г/л альбумина (Rantonen P.J., Meurman J.H., 2000). Исходное значение альбумина у 54,84% добровольцев в группе УСВ значительно превышало значения нормы. Возможно, завышение этих показателей в ротовой жидкости у студентов-добровольцев связано с ограниченным питьевым режимом, отсутствием доступной качественной питьевой воды. Только незначительная часть студентов, принимавших участие в исследовании (19%), имела возможность регулярно употреблять фильтрованную или бутилированную воду. Через 3 месяца альбумин слюны снизился у всех членов группы и оказался в пределах нормы (p< 0,001). Это может свидетельствовать о том, что употребление достаточного (2л) количества жидкости способствовало восстановлению нормального уровня альбуминов ротовой жидкости, а также об изменении питьевой культуры поведения, способствующей оптимизации белковой составляющей ротовой жидкости студентов. Через 6 месяцев тенденция уменьшения альбумина в ротовой жидкости сохранилась, но явилась незначительной и среднее значение приблизилось к нижней границе нормы - 0,06 г/л. Это говорит о том, что употребление оптимального количества воды (2л), способствует поддержанию нормального уровня альбумина в ротовой жидкости. В отличие от опытной группы, в группе студентов-добровольцев, употреблявших неструктурированную воду, исходное среднее значение альбумина было близко к нижней границе нормы (0,283±0,7 г/л) и по истечении трех месяцев практически не изменилось (0,273±0,02 г/л). Следовательно, употребление оптимального количества, но неструктурированной воды не приводит к изменениям этого показателя ротовой жидкости, а снижение общего белка в этой группе связано с изменением других белковых фракций (по всей видимости, глобулинов).
Таблица 5. Показатели белкового обмена в ротовой жидкости испытуемых в динамике эксперимента (M±m) Примечание: *р<0,05, ** р1-2,р1-3 ,р<0,0001, В отличие от существующего мнения о слюне как ионно-белковом истинном водном растворе, в котором находится сложный комплекс белков и различных ионов, получены данные, позволяющие представить слюну как структурированную систему (Леонтьев В.К. с соавт., 1999). Основу слюны составляют мицеллы, связывающие большое количество воды. Мицеллярным строением слюны объясняется одновременное присутствие в ней несовместимых ионов. Стабильность мицелл существенно зависит от рН и ионного состава слюны. Ротовая жидкость богата минеральными компонентами. По данным Зайчика В.Е. и Багирова Ш.Т. (1994) в ней содержится 22 химических элемента. Минеральные компоненты слюны находятся в ротовой жидкости в виде простых и сложных ионов, а также в связанном состоянии с белками (Леонтьев В.К., 1978; Nikiforuk G.,1985, Walsh et al., 2004; Neubert et al., 2010; Kelly et al., 2010). Доказано, что микроэлементы переходят из общего кровотока в слюну посредством диффузии или активного транспорта. Поэтому химический состав слюны во многом отражает состав крови (Строчкова Л.С., 1990; Kuraner T.et al., 1991). В процессе исследований была отмечена параллельная динамика уровня кальция и фосфора в ротовой жидкости. Так, в группе УСВ к третьему месяцу уровень кальция вырос на 124,6%, фосфора на 39,8% относительно исходного уровня, а к шестому месяцу оба эти показателя снизились (содержание кальция - на 20%, фосфора - на 34,6% по сравнению с результатами третьего месяца) (рис. 2). Рис.2. Содержание кальция и фосфора (ммоль/л) в группе УСВ в динамике При длительном употреблении (6 месяцев) структурированной воды в группе УСВ мы наблюдали возвращение уровня фосфора к исходной величине (3,33±0,26 ммоль/л), на фоне повышения уровня кальция до 1,31 ±0,02 ммоль/л и стабильном значении рН ротовой жидкости, свидетельствующем о том, что колебания содержания данных веществ не оказывают существенного влияния на буферные системы полости рта. Эти данные свидетельствуют об улучшении условия минерализации зубной эмали и повышении уровня легкоусвояемого ионизированного кальция в ротовой полости. При этом при употреблении неструктурированной воды мы наблюдали снижение всех показателей. Содержание кальция и фосфора уменьшилось почти в 2 раза на фоне снижения значения рН до 6,8 (рис. 3). Учитывая вышеизложенное, можно отметить, что прием структурированной воды ведет к оптимизации уровня кальция и фосфора в ротовой жидкости, что несомненно, оказывает положительный эффект на целый ряд физиологических функций в организме. По данным литературы, перенасыщенность слюны ионами кальция и фосфора является основным механизмом поддержания Рис.3. Содержание кальция и фосфора (ммоль/л) в группе УНВ в динамике
постоянства состава тканей зуба, препятствуя их растворению, способствуя внедрению ионов из ротовой жидкости в эмаль, регулируя рН (Леонтьев В.К.,1978, 1983; Bullon et al., 2005, 2007; Karlinsey et al., 2009). Известно, что ротовая жидкость содержит ионов натрия почти в 15 раз меньше, чем в крови, однако, концентрация натрия в ней увеличивается при возрастании скорости истечения слюны. В процессе употребления структурированной воды отмечается незначительное снижение среднего уровня натрия в ротовой жидкости с 19,17±0,81 ммоль/л в начале эксперимента до 18,6±0,54 ммоль/л (на 9,7% от исходного уровня) к шестому месяцу УСВ. Данные величины не являются достоверными. В результате употребления структурированной воды отмечается уменьшение содержания хлоридов в ротовой жидкости студентов-добровольцев, с 10,28±0,41 ммоль/л до 9,61±0,25 ммоль/л через 3 месяца и 9,65±0,52 ммоль/л через 6 месяцев эксперимента (таб.6). Таким образом, наблюдается общая тенденция снижения уровня натрия и хлора в группе употреблявшей структурированную воду: через 3 месяца эксперимента содержание натрия и хлора уменьшилось на 0,94% и 6,52% соответственно от изначального. К шестому месяцу исследования уровень натрия снизился практически на 3% от исходного уровня, а количество хлора незначительно возросло. Уровень калия в ротовой жидкости перед началом эксперимента был 17,21±1,15 ммоль/л, через 3 месяца употребления структурированной воды этот показатель в контрольной группе составил 21,15±1,07 ммоль/л, а в группе сравнения практически не изменился. Через 6 месяцев уровень калия в ротовой жидкости студентов-добровольцев, употреблявших структурированную воду продолжал расти и составил 23,92±1,08 ммоль/л. Содержание ионов калия в ротовой жидкости испытуемых УСВ увеличилось на 18,1% (3-й месяц) и на 37,9% (6-й месяц) по сравнению с исходным. За время проведения эксперимента в ротовой жидкости группы УСВ возрос уровень содержания магния с 0,206±0,01 ммоль/л до 0,325 ммоль/л±0,03 (+48%), с высокой достоверностью. В группе УНВ содержание ионов магния уменьшилось на 51%: с 0,21±0,01 ммоль/л до 0,16 ±0,03 ммоль/л. Эти данные свидетельствуют о том, что употребление структурированной воды способствует увеличению уровня кальция, калия и магния в ротовой жидкости, что благоприятно отражается на минерализации костей и зубов, нервно-мышечной проводимости, сократимости миокарда и ряде других физиологических процессов организма. Обращает на себя внимание тот факт, что при употреблении структурированной воды, несмотря на увеличение водной нагрузки, на фоне активизации процесса саливации, отмечается рост показателей минерализации слюны наряду с уменьшением белковой составляющей. В группе сравнения получены данные, которые демонстрируют активацию саливации с параллельным снижением всех исследованных показателей слюны, эффект «разведения» слюны. Полученные результаты могут свидетельствовать, что при употреблении структурированной воды происходит активация вегетативной (парасимпатической) регуляции процесса слюноотделения, тогда как в группе сравнения мы видим лишь увеличение объема воды в слюнной жидкости.
Таблица 6. Показатели минерального обмена в ротовой жидкости испытуемых в динамике эксперимента (M±m)
Примечание: * р1-2,р1-3 ,р<0,0001, ** р2-3 , р<0,0001, ***р<0,02, достоверность различий между группами УСВ и УНВ, р<0,0001 3. Влияние употребления структурированной воды на психофизиологические характеристики испытуемых В последнее десятилетие ХХ века многие ученые стали говорить о когнитивной революции в нейронауке поведения. Было признано, что наряду с условнорефлекторным принципом в организации высшей нервной деятельности существует еще одна общая закономерность, прослеживаемая в работе высших отделов головного мозга: формирование внутренних состояний, которые могут в значительной мере определять, регулировать поведение человека (Костандов Э.А., 2004; Ilsen, 2010; Adolphs, 2010; McEwen BS, Gianaros PJ et al., 2010). Костандов определяет вниманиекак «сосредоточенность деятельности субъекта в данный момент времени на каком-либо реальном или идеальном объекте (предмете, событии, образе, рассуждении и т.д.)». Показатели умственной работоспособности служат для интегральной характеристики функционального состояния организма. Умственная работоспособность в основном зависит от напряженности функционирования сенсорных систем, воспринимающих информацию, от состояния внимания, памяти, мышления, выраженности эмоций. Перед началом эксперимента определялся ряд параметров: пропускная способность зрительного анализатора (S1, S2) в двух вариантах и коэффициент продуктивности (Q). Через три месяца употребления структурированной воды эти значения снизились. Такая динамика результатов тестов, связана с тем, что проведение второго тестирования совпало с концом учебного года и периодом летней сессии. Через 6 месяцев от начала эксперимента все показатели улучшились, но не достигли максимальных значений. По результатам теста САН в процессе употребления структурированной воды увеличился процент студентов, показавших высокий уровень самочувствия, активности и настроения (рис. 4). А Б Рис.4. Динамика показателей самочувствия (А) и активности (Б) в группе УСВ В группе сравнения были получены следующие результаты теста САН: перед началом употребления воды любого качества в объеме не менее двух литров, высокий показатель самочувствие был характерен для 88,89% испытуемых, средний для 11,11%.Однако при повторном тестировании через три месяца эти показатели ухудшились и составили: высокий у 50%, средний у 33,33% и низкий обнаружился у 16,67% тестируемых. А Б Рис.5. Динамика показателей активности (А) и самочувствия (Б) в группе УНВ
Высокий показатель активности был у 50% членов контрольной группы, у 44.44% был средний показатель активности, у 5,56% - низкий. Через три месяца результаты тестирования были следующие: высокий уровень у 41,67%, средний у 16,66%, низкий показатель был у 41,67%.Аналогичная тенденция ухудшения показателей тестирования наблюдалась при оценке настроения. Изначально высокий уровень настроения отмечали 83,33% испытуемых, средний 16,67%. При повторном тестировании высокий показатель настроения был у 75% тестируемых, средний у 8,33% и низкий уровень настроения отмечали 16,67%. Результаты исследования теста САН показывают, что для устойчивости и оптимизации психофизиологических процессов имеет значение не питьевой режим, а качество употребляемой воды. Тест Спилберга-Ханинапринадлежит к числу методик, исследующих психологический феномен тревожности. Измерение тревожности как свойства личности особенно важно, так как это свойство во многом обуславливает поведение субъекта. Определенный уровень тревожности - естественная и обязательная особенность активной деятельности личности. Проведение теста Спилберга показало, что уровень ситуативной тревожности через 3 месяца несколько возрос по сравнению с изначальным. Однако повышение уровня тревожности в этот временной промежуток было связано с периодом сессии. Через 6 месяцев от начала употребления воды высокий уровень ситуативной тревожности не отмечался ни у одного испытуемого, а значение низкого выросло до 27,27%, Уровень ситуативной тревожности имел общую тенденцию к снижению высокой тревожности и преобладанию среднего уровня тревожности - 72,73%. Интересно, что личностная тревожность имела тенденцию к снижению весь период эксперимента. Через 3 и 6 месяцев употребления воды с измененной структурой большинство студентов имели средний уровень личностной тревожности, высокий уровень отсутствовал, несмотря на то, что в первом случае тестирование совпало с периодом экзаменационной сессии. Можно предположить, что тестируемые стали более стабильны в ситуациях, касающихся их компетенции. В группе УНВ через тримесяца низкий уровень тревожности не изменился (16,66%), но на 11,11% возросло количество тестируемых с высоким уровнем тревожности. Анализируя результаты тестирования можно дать практические рекомендации. Так, лицам с высокой степенью тревожности следует формировать чувство уверенности и успеха. Им необходимо смещать акцент с внешней требовательности, категоричности, высокой значимости в поставке задач на содержательное осмысление деятельности и конкретное планирование по подзадачам. Для низкотревожных людей, напротив, требуется пробуждение активности, подчеркивание мотивационных компонентов деятельности, возбуждение заинтересованности, высвечивание чувства ответственности в решении тех или иных задач. Таким образом, прием структурированной воды, способствуя увеличению процента лиц со средним уровнем тревожности, создает оптимальные условия для активной, позитивной жизнедеятельности. Сравнение результатов исследования, полученными разными методическими приемами, позволяет сделать заключение о том, что ежедневный прием структурированной воды в количестве не менее 2 л в течение 6 месяцев влияет на функциональные показатели разных физиологических систем, включая водно-солевой обмен и физико-химический состав ротовой жидкости; вегетативную регуляцию; психологический статус испытуемых. Системные изменения в организме испытуемых, принимавших структурированную воду, выявлены в динамике физико-химических и биохимических констант ротовой жидкости, в замедлении старения оптических сред глаз, в увеличении прозрачности кристаллограмм ротовой жидкости, в стабилизации проявлений психофизиологической деятельности на протяжении всего периода эксперимента. ВЫВОДЫ 1. Установлено, что прием структурированной воды способствует улучшению самочувствия, повышает активность и настроение; вызывает снижение личностной тревожности при сохранении адекватности ситуационной реакции. 2. Установлено позитивное влияние структурированной воды на показатели прозрачности оптических сред глаза, остроту зрения. Через шесть месяцев эксперимента у испытуемых рефракция практически не изменилась, показатель уменьшился на -0,13Д, что на 85% ниже среднестатистических данных по России. 3. Структурированная вода влияет на режим и характер саливации: увеличился суточный объем ротовой жидкости, скорость саливации; выявлено изменение физико-химических параметров ротовой жидкости: снижение электропроводности и оптической плотности, увеличение резерва кальция и фосфора, магния, сохранение баланса калия и натрия, при устойчивом оптимальном рН в динамике наблюдений, что обеспечивает оптимальные условия реминерализации эмали. 4. Употребление структурированной воды влияет на характер рекретирования высоко- и низкомолекулярных соединений из крови. Показано, что ее использование ведет к снижению концентрации альбумина и общего белка при одновременном увеличении содержания кальция, фосфора и магния в ротовой жидкости в отличие от аналогичного питьевого режима с применением неструктурированной воды в том же объеме, не вызывающего снижения уровня альбумина, но ведущего к снижению общего белка и минеральных компонентов ротовой жидкости. Подобные изменения указывают на стимуляцию парасимпатических влияний на процесс слюноотделения при приеме структурированной воды. 5. Изменения состава ротовой жидкости под влиянием приема структурированной воды визуализируются кристаллоскопической картиной. Через 3 месяца употребления структурированной воды в 39,3% образцов солевая зона приобрела упорядоченное построение, увеличилась длина кристаллов. В белковой зоне выявлено увеличение прозрачности. В конце 6-го месяца эксперимента в кристаллограммах у 75% испытуемых солевые кристаллы приобрели наиболее удлиненную и более правильную геометрическую форму. 6. Выявленные многообразные изменения состава ротовой жидкости, увеличение прозрачности оптических сред глаза, снижение веса тела, изменение психоэмоционального состояния добровольцев свидетельствует о высокой биологической активности структурированной воды и служит основанием для рекомендации ее употребления с учетом объема и длительности приема. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Результаты, полученные при проведении исследований, научно обосновывают целесообразность употребления структурированной воды в объеме не менее двух литров в сутки. Это открывает возможность рекомендовать структурированную воду как простой и доступный способ укрепления здоровья, профилактики заболеваний полости рта (камнеобразования, кариеса, заболеваний пародонта) и синдрома хронической усталости, как один из способов замедления ухудшения зрения. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Гильмиярова, Ф.Н. Ротовая жидкость: показатели метаболизма при различной групповой принадлежности крови / Ф.Н. Гильмиярова, Ю.В. Мякишева, Г.М. Баишева, И.О. Павлова и др. / Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - №9. - С. 60-61. 2. Тороповский, А.Н. Молекулярно-генетические методы в практике здравоохранения / А.Н. Тороповский, Ю.В. Мякишева, Г.М. Баишева, И.О. Павлова и др. / Клиническая лабораторная диагностика. - 2008.- № 9. - С.41. 3. Гусякова, О.А.Молекулярные признаки АВО принадлежности в обеспечении специфики ответной реакции на биологически активные вещества / О.А. Гусякова, И.А. Зубова, Ю.В. Мякишева, Г.М. Баишева, И.О. Павлова и др./ Вестник РУДН. - 2009. - № 3. - С. 28-33. 4. Бабичев, А.В. К поиску средств метаболической коррекции при экологически индуцированных нарушениях состояния здоровья / А.В. Бабичев, Г.М. Баишева, И.Е Гильмиярова, И.О. Павлова / Материалы межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины». - Самара, 2005- С. 41-45. 5. Мякишева, Ю.В. Показатели метаболизма в крови больных хроническим гепатитом С с разным уровнем виремии / Ю.В. Мякишева, Н.А. Преснякова, И.А. Зубова, О.А. Карташова, И.О. Павлова и др./ Материалы межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины». - Самара, 2005 -С. 213-219. 6. Кузнецова, О.Ю. Метаболический статус больных вирусным гепатитом В / О.Ю. Кузнецова, И.Ф. Сидорова, Н.А. Преснякова, Л.С. Карслян, И.О. Павлова и др./ Материалы VI международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке». - Москва, РУДН, 2005. - С. 229-235. 7. Мякишева, Ю.В.Информативность изучения ротовой жидкости для оценки метаболических эффектов масла расторопши / Ю.В. Мякишева, О.А. Кизирова, И.О. Павлова / Материалы IV международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке». - Москва, РУДН, 2005. - С. 370- 371. 8. Гильмиярова, Ф.Н. Продуктивные подходы к неинвазивной диагностике: исследование ротовой жидкости / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, Л.Н. Виноградова, И.О. Павлова и др. / Материалы X Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век». - Бангкок - Паттайя, 2006. - С. 86-92. 9. Баишева, Г.М. Физико-химические и метаболические показатели ротовой жидкости при употреблении структурированной воды / Г.М. Баишева, Э.Ф. Валиахметова, И.О. Павлова / Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 25-летию Института последипломного образования Самарского государственного медицинского университета «Актуальные вопросы последипломного образования». - Самара, 2008. - С.213-214. 10. Гильмиярова, Ф.Н. Особенности метаболического и клеточного состава крови, ассоциированные с групповой принадлежностью в системе АВ0, в норме и патологии / Ф.Н. Гильмиярова, Ю.В. Мякишева, О.А. Кизирова, О.А. Гусякова, И.О. Павлова и др. // Астраханский медицинский журнал. - 2008. - Т. 3, № 3. - С. 76-79. 11. Гильмиярова, Ф.Н. Фундаментальные исследования молекулярных признаков АВ0-принажлежности, реализованных в показателях метаболизма и клеточного состава крови в норме и патологии / Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, О.А. Гусякова, И.А. Зубова, И.О. Павлова и др. // Материалы Российской конференции, посвященной 89-летию со дня рождения Р.И. Лифшица». - Челябинск, 2009. - С. 27-29. Патенты и изобретения: 12. Дукович, Е.В.Программа для анализа кристаллоскопической картины ротовой жидкости пациента / Е.В. Дукович, Ф.Н. Гильмиярова, В.М. Радомская, Ю.В. Мякишева, Э.М. Гильмияров, Г.М. Баишева, И.О. Павлова и др./ Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ № 2007614228 от 4.10.2007. Файлы для загрузки
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Дизайн и поддержка: Interface Ltd. |
|
